外泌体表征

项目简介

外泌体提取完成后，需要对外泌体进行鉴定。根据国际细胞外囊泡研究协会 (ISEV) 针对囊泡研究提出的2018最小试验要求 (MISEV2018)细胞外囊泡（EVs，含外泌体）鉴定主要分为总体表征和个体表征两部分:

总体表征：建议用Western Blot或流式细胞术对阳性标志物和阴性标志物进行表征。要求至少包括1 个跨膜蛋白和1 个细胞溶质蛋白、1 个阴性蛋白质标志物。

个体表征：（1）形态表征：应用透射电子显微镜(TEM)对外泌体的形态及粒径进行表征；

         （2）粒径分析：应用纳米颗粒跟踪分析(NTA)或纳米流式(NanoFCM)方法，对粒径分布进行分析。

    逸微健华为您提供包括Western Blot、TEM、NTA、ELISA定量在内的全套外泌体鉴定服务。

表征方法

Western Blot：三阳一阴对照；外泌体表面marker（指标蛋白）如CD9、CD63、CD81、TSG101、HSP70等，常用的阴性蛋白标志物：Calnexin、GM130。

ELISA定量：应用外泌体ELISA定量检测试剂盒（EV02-04-01）对外泌体进行快速定量

电镜检测（TEM）：设备：日立

粒径分析：对粒径分布进行分析；设备：瑞芯

服务流程

客户提供

血清、血浆、脑脊液、尿液、胸水、腹水、唾液等体液、细胞上清、植物样本和其他特殊样本

送样要求

不同生物流体样本类型根据后续研究目的和方法按照要求进行样本前处理。

注：

血浆样本：请用EDTA抗凝管采集血液，将采集到的血液在4 ℃下1500 g，离心20 min，去除血液中的细胞；取上清，4 ℃下3000 g，离心15 min，收集上清（血浆），-80 ℃保存，足量干冰寄送。

血清样本：血液收集在离心管中室温条件下静置1 h进行凝固分层；然后3000 rpm室温离心10 min;取上清转至干净的离心管中。再12000 rpm、4 ℃离心10 min，取上清分装到 1.5 mL 离心管中每管0.2 mL，-80 ℃冻存，足量干冰寄送。

尿液样本：采集前、中、后段晨尿，4 ℃条件下2000 g离心20 min，除去细胞，-80 ℃保存，足量干冰寄送。

细胞上清：先用200-300 g离心10 min，再用3000 g离心10 min，最后0.22 μm过膜或者10000 g离心30min。

交付结果

外泌体粒径、浓度检测报告

WB检测结果（三阳一阴）

电镜图片（提供结果标准：100纳米3张，200纳米3张，合计6张）

备注：如有特殊需求可电话咨询。

项目周期

7-10个工作日

案例展示

结果展示

ELISA定量检测标曲