项目简介
蛋白质磷酸化(Phosphorylation)是由蛋白质激酶催化的把ATP的磷酸基转移到底物蛋白质氨基酸残基(Ser、Thr、Tyr)上的过程,或者在信号作用下结合GTP,是生物体内一种普通的调节方式,细胞内有超过30%的蛋白质发生磷酸化修饰,在细胞信号转导、调控细胞增殖、发育、分化、凋亡过程中起重要作用。蛋白质磷酸化是调节和控制蛋白质活力和功能的最基本、最普遍,也是最重要的机制。
技术原理
首先从样品中提取外泌体,再将外泌体蛋白酶解成肽段混合物,通过我司独特的磷酸化肽段富集试剂盒(PolyMAC)进行磷酸化肽段的富集,再上样至液相色谱-串联质谱中进行定性定量分析。
图1.磷酸化蛋白组学技术流程
服务优势
基于独家研发的PolyMAC磷酸化富集材料提升对磷酸化肽段的富集程度。
提供从样品前处理到生信分析的一站式技术服务。
服务周期短,性价比更高。
服务流程
客户提供
血清、血浆、脑脊液、尿液、胸水、腹水、唾液等体液、细胞上清、植物样本和其他特殊样本,也可以提供已经提取好的外泌体。
送样要求
不同生物流体样本类型根据后续研究目的和方法按照要求进行样本前处理。
注:
血浆样本:请用EDTA抗凝管采集血液,将采集到的血液在4 ℃下1500 g,离心20 min,去除血液中的细胞;取上清,4 ℃下3000 g,离心15 min,收集上清(血浆),-80 ℃保存,足量干冰寄送。
血清样本:血液收集在离心管中室温条件下静置1 h进行凝固分层;然后3000 rpm室温离心10 min;取上清转至干净的离心管中。再12000 rpm、4 ℃离心10 min,取上清分装到 1.5 mL 离心管中每管0.2 mL,-80 ℃冻存,足量干冰寄送。
尿液样本:采集前、中、后段晨尿,4 ℃条件下2000 g离心20 min,除去细胞,-80 ℃保存,足量干冰寄送。
细胞上清:先用200-300 g离心10 min,再用3000 g离心10 min,最后0.22 μm过膜或者10000 g离心30min。
交付结果
外泌体提取、蛋白裂解质控报告;
蛋白组学生信分析报告;
完整的实验步骤、使用仪器、试剂来源、软件检索参数等。
项目周期
15个工作日
文献资料
[1] Chen IH, Xue L, Hsu CC, Paez JS, Pan L, Andaluz H, Wendt MK, Iliuk AB, Zhu JK, Tao WA. Phosphoproteins in extracellular vesicles as candidate markers for breast cancer. Proc Natl Acad Sci U S A. 2017 Mar 21;114(12):3175-3180.
[2] Andaluz Aguilar H, Iliuk AB, Chen IH, Tao WA. Sequential phosphoproteomics and N-glycoproteomics of plasma-derived extracellular vesicles. Nat Protoc. 2020 Jan;15(1):161-180.
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